口腔黏膜刺激試驗(yàn)

口腔黏膜柔軟濕潤，易受損傷，暫時或長期與口腔黏膜組織接觸的口腔護(hù)理產(chǎn)品、口腔醫(yī)療器械等均需對口腔黏膜產(chǎn)生的刺激作用進(jìn)行評估。口腔黏膜刺激性檢測試驗(yàn)是在體外模擬口腔護(hù)理類產(chǎn)品、口腔醫(yī)療器械對黏膜的作用，通過檢測組織活力確定此類產(chǎn)品對口腔黏膜產(chǎn)生的刺激性有無及強(qiáng)弱。

口腔刺激試驗(yàn)應(yīng)僅考慮用于預(yù)期與口腔組織接觸的材料（如 牙膏、漱口水、口腔護(hù)理液、義齒等產(chǎn)品）,并且只有在用其他方法不能得到安全性數(shù)據(jù)的情況下才考慮進(jìn)行。

試驗(yàn)依據(jù)

GB/T 16886.10-2017《醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià) 第 10部分：刺激與皮膚致敏試驗(yàn)》

ISO 10993-10 醫(yī)療器械的生物學(xué)評價(jià) 第10部分：皮膚致敏試驗(yàn)

一般采用以上兩種標(biāo)準(zhǔn)中推薦的方法對樣品原液/樣品浸提液引起口腔黏膜刺激反應(yīng)的潛在性進(jìn)行評價(jià)。

應(yīng)排除的試驗(yàn)材料

（1）任何已顯示為皮膚或眼的刺激物；

（2）pH≤2.0或 ≥11.5的材料不應(yīng)再進(jìn)行試驗(yàn)。

以上兩種材料可標(biāo)示為潛在的口腔組織刺激物。

需要進(jìn)一步的風(fēng)險(xiǎn)表征/評定的例外情況下，即使已知被試材料是刺激物或材料的pH在上述范圍之外可能還是需要進(jìn)行測試，這種情況應(yīng)論證并形成文件。

試驗(yàn)材料

在進(jìn)行試驗(yàn)以及解釋刺激/致敏試驗(yàn)數(shù)據(jù)時,應(yīng)考慮醫(yī)療器械在人體應(yīng)用時的接觸性質(zhì)、程度、頻率、時間和條件等因素,對這些試驗(yàn)最關(guān)鍵的因素之一就是試驗(yàn)材料的制備 。

浸提條件建立在通?？尚胁⒔?jīng)論證為一個標(biāo)準(zhǔn)化方法的基礎(chǔ)之上,在多數(shù)情況下為產(chǎn)品使用 的適當(dāng)加嚴(yán)的條件。應(yīng)在下列之一的條件下進(jìn)行浸提：

a)    (37±1) ℃     (72±2)h;

b)    (50±2) ℃     (72±2)h;

c)    (70±2) ℃      (24±2)h;

d)    (121±2) ℃    (1±0. 1)h。

標(biāo)準(zhǔn)表面積和浸提液體積

注:由于制造過程原因,許多彈性體表面特性可能與一般塊狀材料的表面特性有所不同。

浸提時應(yīng)使用極性和非極性兩種溶劑。浸提介質(zhì)示例:

a)    極性浸提介質(zhì):水、生理鹽水;

b)   非極性浸提介質(zhì):符合各國藥典質(zhì)量規(guī)定的新鮮精制植物油(如棉籽油或芝麻油);

c)    其他浸提介質(zhì):乙醇/水、乙醇/生理鹽水、聚乙二醇400(稀釋至生理滲透壓)、二甲基亞砜。

動物與管理

應(yīng)使用健康、初成年的金黃色地鼠, 同一品系,雌雄不限。應(yīng)使動物適應(yīng)環(huán)境,并按 ISO10993-2的規(guī)定飼養(yǎng)。

除此以外 ,適當(dāng)時給動物套上1個3mm~4mm寬的適用項(xiàng)圈,使動物能維持正常進(jìn)食和呼吸,且又能防止動物口腔內(nèi)棉球移出。試驗(yàn)期間動物每天稱重,連續(xù)7d。在此期間,檢查每只動物的體重下降情況,必要時調(diào)整項(xiàng)圈。如動物體重持續(xù)下降,將其從試驗(yàn)中淘汰。

初試應(yīng)至少使用3只動物評價(jià)試驗(yàn)材料。

注 : 另取動物用相應(yīng)的陰性對照材料或空白液進(jìn)行試驗(yàn)可能適用。

初試反應(yīng)如疑似或不明確 ,應(yīng)考慮進(jìn)行復(fù)試。

試驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)樣品制備

將動物稱重后，用龍膽紫進(jìn)行標(biāo)記

除掉動物項(xiàng)圈,翻轉(zhuǎn)頰囊用生理鹽水沖洗后,檢查有無異常。

對于固體試驗(yàn)材料,可直接將樣品(直徑不大于5mm)放入頰囊內(nèi)。

對液體試驗(yàn)材料或浸提液樣品,則可用棉球浸透樣品,記錄吸收的體積,放入動物的一側(cè)頰囊內(nèi)。也可將適宜體積的樣品直接灌注入頰囊。

另一側(cè)頰囊不放樣品作為對照。應(yīng)使用適宜的對照動物進(jìn)行平行試驗(yàn)。

必要時重新給動物帶上項(xiàng)圈放回籠中。

接觸時間應(yīng)與材料預(yù)期實(shí)際使用時間一致,但不能少于5min。

接觸后除去項(xiàng)圈和棉球,用生理鹽水沖洗頰囊,注意不要污染另一側(cè)頰囊。

對于急性接觸,每小時(±0.1h)重復(fù)上述步驟,共4h。

重復(fù)接觸試驗(yàn)時,應(yīng)根據(jù)預(yù)期臨床應(yīng)用情況確定試驗(yàn)用量、接觸次數(shù)、時間和間隔期。

動物觀察

取出棉球后肉眼觀察頰囊,并且在每次接觸前(如需重復(fù)接觸時)檢查頰囊。

描述動物頰囊的一般狀況,并按表B.2給出的記分系統(tǒng)判定動物每一觀察期頰囊表面紅斑反應(yīng)記分。記錄結(jié)果以出具試驗(yàn)報(bào)告。

末次接觸后(24±2)h肉眼觀察頰囊,無痛處死地鼠。取頰囊有代表性部位的組織樣品,放入適宜的固定液中固定后進(jìn)行組織學(xué)檢查。

結(jié)果評定

肉眼觀察評價(jià)

比較試驗(yàn)側(cè)頰囊與對側(cè)頰囊,如有對照組,則還應(yīng)與對照組動物的頰囊進(jìn)行比較。每一 觀察記分(見表B.2)相加后再除以觀察總數(shù)得出每只動物平均記分。

注 1: 這些觀察可能有助于組織學(xué)評價(jià)。

注 2: 試驗(yàn)材料首次接觸前的初始觀察結(jié)果不包括在平均記分中。

組織學(xué)評價(jià)

氯化鈉浸提組

棉籽油浸提組

應(yīng)由病理學(xué)家對口腔組織顯微鏡下的刺激作用進(jìn)行評價(jià),可按《口腔、陰莖、直腸和陰道組織反應(yīng)顯微鏡檢查計(jì)分系統(tǒng)》給出的記分系統(tǒng)對每一組織進(jìn)行評分。

試驗(yàn)組中所有動物的顯微鏡評價(jià)記分相加,再除以觀察總數(shù),得出試驗(yàn)組平均記分。對照組同法計(jì)算。最大記分為16。

口腔、陰莖、直腸和陰道組織反應(yīng)顯微鏡檢查記分系統(tǒng)

對照頰囊或?qū)φ談游锏娘@微鏡評價(jià)總分大于9時可能表明有病理改變,可能是試驗(yàn)操作時造成的損傷。如其他試驗(yàn)或?qū)φ談游锍霈F(xiàn)同樣的高分,無論是哪種情況,可能都有必要進(jìn)行復(fù)試。

試驗(yàn)組平均記分減去對照組平均記分得出刺激指數(shù)。

刺激指數(shù)表

對于重復(fù)接觸試驗(yàn),可將《口腔、陰莖、直腸和陰道組織反應(yīng)顯微鏡檢查計(jì)分系統(tǒng)》修改為適合于對有關(guān)慢性刺激組織反應(yīng)的評價(jià)。

試驗(yàn)報(bào)告

試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)包括:

a) 試驗(yàn)樣品的描述;

b) 試驗(yàn)樣品的預(yù)期用途/應(yīng)用;

c) 制備試驗(yàn)樣品所用方法的詳細(xì)描述;

d) 試驗(yàn)動物的描述;

e) 接觸方法;

f) 試驗(yàn)部位記分;

g) 觀察記錄;

h) 組織學(xué)評價(jià);

i) 結(jié)果評定。